分享一篇發表在Chem. Sci.上的文章，題目為“A General Approach for Activity-based Protein Profiling of Oxidoreductases with Redox-differentiated Diarylhalonium Warheads”，通訊作者是來自奧地利格拉茨技術大學的Rolf Breinbauer和格拉茨醫科大學的Ruth Birner-Gruenberger兩位教授，他們的研究方向聚焦于化學生物學、天然產物合成和組學技術。這篇文章中，作者開發了基于二芳基鹵鎓的ABPP探針用于標記氧化還原酶。
基于活性的蛋白質組分析（ABPP）是一種重要的化學蛋白質組學工具，其目前主要應用于針對具有親核殘基的蛋白進行分析。然而其他具有復雜催化活性的酶類別如氧化還原酶，仍然缺乏關注。此前已經有一些研究設計針對氧化還原酶的ABPP探針，這些探針的彈頭被目標蛋白質氧化激活并轉化為親電試劑，被附近的親核基團進攻形成共價標記。這篇文章中，作者開發了一類基于二芳基鹵鎓還原激活的氧化還原酶ABPP探針。
作者首先設計并合成了多種帶有不同二芳基鹵鎓反應基團和不同長度linker的探針，并通過循環伏安法和NMR證明，這些探針可以在氧化還原酶的單電子還原下形成芳基自由基中間體。
接著，作者利用重組表達的膽堿氧化酶、丁香酚氧化酶、乳酸脫氫酶等具有不同輔因子的氧化還原酶進行體外探針標記和膠內熒光分析，證明探針可以基于氧化還原酶活性進行共價標記。
隨后作者使用這些ABPP探針進行了蛋白質組富集和質譜鑒定，其中3個探針具有較好的表現，分別可以顯著標記24、19和22中蛋白質，其中包含多種已經被注釋為氧化還原酶的蛋白質。作者進一步確定了探針的標記位點包含所有氨基酸側鏈類型，證明探針的標記基于自由基機制。
?總之，這篇文章中作者設計了一類基于二芳基鹵鎓的探針，用于氧化還原酶的基于活性的蛋白質組分析。
本文作者：LCX
責任編輯：LZ
DOI：10.1039/D4SC08454C
原文鏈接：https://doi.org/10.1039/D4SC08454C
