分享一篇發(fā)表在Angew. Chem. Int. Ed.上的文章，題目為 “Simple and Rapid Tumor EV Enrichment Enabled by Long DNA Probe-Guided Entanglement”，通訊作者是來(lái)自重慶醫(yī)科大學(xué)的李欣宇醫(yī)生，丁世家教授，其中丁教授的研究方向是分子診斷與生物分析化學(xué)。
細(xì)胞外囊泡（EVs）的特定亞群在生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、疾病診斷和治療藥物方面具有重要的臨床潛力。傳統(tǒng)的細(xì)胞外囊泡分離方法包括超速離心（UC）和多步超濾（UF）,需要大量人力和時(shí)間成本，本文開發(fā)了一種快速簡(jiǎn)單的細(xì)胞外囊泡富集方法。
作者開發(fā)的策略稱為長(zhǎng)DNA探針引導(dǎo)的EV糾纏（LODGE）。具體是使用兩個(gè)長(zhǎng)DNA探針，探針上具有用于靶蛋白識(shí)別的DNA適配體，還有間隔序列，用于夾板鏈識(shí)別的序列以及部分用于形成sG4陷阱的序列。長(zhǎng)DNA探針通過(guò)適配體與腫瘤來(lái)源的EV上的蛋白結(jié)合后，與夾板鏈進(jìn)行雜交，纏結(jié)，最終可以在10000g，10min離心下被分離出來(lái)。
作者首先驗(yàn)證了該策略，作者使用LpPDL1和LpEpCAM成功實(shí)現(xiàn)了晚期肺癌患者的血漿樣本中富含PDL1和EpCAM的腫瘤EV的富集，并證明了LODGE方法的污染物清楚率與金標(biāo)準(zhǔn)UC相當(dāng)，高于IP和UF。
然后作者考察了LODGE策略的應(yīng)用場(chǎng)景。首先在蛋白質(zhì)組鑒定方面，LODGE策略鑒定的蛋白與UC數(shù)量相當(dāng)，但火山圖中可以看出腫瘤蛋白的明顯富集。然后作者證明了LODGE策略分離的腫瘤EV在DNase1處理后保留較高的生理活性，其H1975細(xì)胞攝取率高于UC，且細(xì)胞劃痕后愈合率也顯著高于UC和contro組。
最后作者發(fā)展了LODGE-ThT方法用于分離和檢測(cè)腫瘤EV，具體來(lái)說(shuō)就是集成LODGE和G4/ThT熒光系統(tǒng)。作者驗(yàn)證了該方法的可行性后將該方法用于非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的準(zhǔn)確診斷中，LODGE-ThT方法可以準(zhǔn)確診斷NSCLC和良性肺結(jié)節(jié)以及健康患者。最后作者還通過(guò)對(duì)tEV亞群和臨床指標(biāo)的機(jī)器學(xué)習(xí)用于癌癥類型分類。
?總的來(lái)說(shuō)，本研究建立了一種新穎、通用的LODGE方法，能夠簡(jiǎn)單、快速、特異地從復(fù)雜的生物培養(yǎng)基中分離tEV亞群。
本文作者：YDP
責(zé)任編輯：WYQ
DOI：10.1002/anie.202501804
原文鏈接：https://doi.org/10.1002/anie.202501804
